28°C දී ස්ථිතික පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීමෙන් දින 25 කට පසු, *Pleurotus ostreatus* NRC620 හි ලැකේස් දිලීර වගා මාධ්යයේ ඉහළම ක්රියාකාරිත්වය පෙන්නුම් කළේය. මෙම එන්සයිම සඳහා ප්රශස්ත pH අගය සහ උෂ්ණත්ව අගයන් පිළිවෙලින් 3.0 සහ 70°C විය. 40°C සහ 50°C දී පැය 2 ක පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීමෙන් පසු, එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය පිළිවෙලින් 68.33% සහ 59.61% රඳවා ගත්තේය. සයිටේ්රට්-පොස්පේට් බෆරයේ (pH 7.0) පැය 2 ක පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීමෙන් පසු, එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය 100% ක් ලෙස පැවතුනි. 10 mM MgSO₄ සහ CuSO₄ එකතු කිරීම පිළිවෙලින් එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය ආසන්න වශයෙන් 21% සහ 35% කින් වැඩි කළ අතර, NaCl, MnCl₂, KCl සහ CaCl₂ එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය වළක්වන ලදී. ABTS උපස්ථරයක් ලෙස භාවිතා කරමින්, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ලැකේස් හි චාලක පරාමිතීන් (Km සහ Vmax) පිළිවෙලින් 1.99 mM සහ 16,217 μmol min−1 L−1 විය. ඇපල් යුෂ සාම්පලවල එන්සයිම ප්රතිකාරය pH අගය සහ දුස්ස්රාවිතතාවය යන දෙකම සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කළ අතර, මෙම අඩුවීම ගබඩා කාලය වැඩි වීම සමඟ සහසම්බන්ධ විය. ලැකේස් ප්රතිකාරය ඇපල් යුෂ වල මුළු ෆීනෝලික් අන්තර්ගතයේ සුළු අඩුවීමක් ඇති කළ නමුත් ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වයේ අඩුවීමක් දක්නට නොලැබුණි.
මෑත වසරවලදී, පර්යේෂකයන් ආහාර කර්මාන්තයේ හරිත ජෛව තාක්ෂණයේ යෙදීම කෙරෙහි අවධානය යොමු කර ඇත. ලැකේස් යනු ආහාර කර්මාන්තයේ වඩාත්ම ප්රයෝජනවත් එන්සයිම වලින් එකක් වන අතර යුෂ සැකසීම, පිළිස්සීම, වයින් ස්ථායීකරණය සහ ආහාර නිෂ්පාදනවල කාබනික ගුණාංග වැඩි දියුණු කිරීම වැනි ක්ෂේත්රවල යෙදීම් සොයා ගනී.1බොහෝ ඉහළ ශාක හා ක්ෂුද්ර ජීවීන් ලැකේස් ස්රාවය කරයි,2සහ ඩියුටරොමයිසීට්ස්, ඇස්කොමයිසීට්ස් සහ බැසිඩියොමයිසීට්ස් වැනි දිලීර වලටද ලැකේස් නිපදවිය හැක.3ලැකේස් (EC 1.10.3.2) යනු නිල් ඔක්සිඩේස් එකක් වන අතර එය විවිධ තඹ පරමාණු තුනකින් සමන්විත පද්ධතියක් භාවිතා කරමින් අණුක ඔක්සිජන් ජලය බවට අඩු කරන අතර එමඟින් විවිධ ෆීනෝලික් සංයෝග සහ ඇරෝමැටික ඇමයින් ඔක්සිකරණය කරයි. පළතුරු සහ එළවළු යුෂ නිෂ්පාදනය අතරතුර, එන්සයිම සහ එන්සයිම නොවන දුඹුරු පැහැ ගැන්වීම තීරණාත්මක ගැටළු වේ.4මෙම ද්රව්ය යුෂ වල වර්ණය, රසය සහ සුවඳ කෙරෙහි අහිතකර ලෙස බලපාන බැවින්, ඒවා ඉවත් කළ යුතුය.5
සියලුම පලතුරු අතරින්, ඇපල් ලොව පුරා සහ යුරෝපීය සංගමයේ වැඩිපුරම පරිභෝජනය කරනු ලැබේ. 2019 දී, ඇපල් නිෂ්පාදනය ලොව පුරා තුන්වන ස්ථානයට පත් වූ අතර, එය ටොන් මිලියන 87 ඉක්මවයි.6ඇපල් වල ෆ්ලේවනොයිඩ් සහ කැෆේක් අම්ලය සහ ක්ලෝරොජනික් අම්ලය වැනි ෆීනෝලික් අම්ල ඇතුළු බොහෝ ෆීනෝලික් සංයෝග අඩංගු වේ.7ඇපල් යුෂ සාමාන්යයෙන් එහි පැහැදිලි ස්වරූපයෙන් පරිභෝජනය කරන බැවින්, පෙරීමේ ක්රියාවලියේදී ෆීනෝලික් සංරචක වලින් ආසන්න වශයෙන් 50% සිට 90% දක්වා ප්රමාණයක් අහිමි වේ.8අද වන විට පාරිභෝගිකයින් ඉහළ පොලිෆෙනෝල් අන්තර්ගතයක් සහිත වලාකුළු සහිත ඇපල් යුෂ වැනි අවම වශයෙන් සැකසූ නිෂ්පාදන තෝරා ගැනීමට නැඹුරු වෙති. කෙසේ වෙතත්, එහි ඉහළ ෆීනෝලික් අන්තර්ගතය නිසා, මෙම වර්ගයේ ඇපල් යුෂ විශේෂයෙන් දුර්වර්ණ වීමට සහ අඳුරු වීමට ගොදුරු වේ.9ඇපල් යුෂ අඳුරු වීම අඩු කිරීමට හෝ වැළැක්වීමට 60-90°C දී පැස්ටරීකරණය වැනි තාප පිරියම් කිරීමේ ක්රම ඇතුළු විවිධ තාක්ෂණයන් භාවිතා කරයි.10කෙසේ වෙතත්, Sauceda-Gálvez විසින් පර්යේෂණයට අනුව11, තාප සැකසුම් මගින් වාෂ්පශීලී රසායනික ද්රව්ය විනාශ කළ හැකි අතර ඇපල් යුෂ වල කාබනික ගුණාංගවලට බලපෑම් කළ හැකිය. තාප සැකසුම් ක්රම සඳහා විකල්ප අතරට සුපිරි ක්රිටිකල් කාබන් ඩයොක්සයිඩ්, පාරජම්බුල කිරණ, අල්ට්රා සවුන්ඩ්, අධි ජල ස්ථිතික පීඩනය හෝ අධි පීඩන සමජාතීයකරණය ඇතුළත් වේ.12මෙම තාක්ෂණයන්හි කාර්යක්ෂමතාව සහ සුදුසු පලතුරු යුෂ වල අස්වැන්න භාවිතා කරන පරාමිතීන් සහ නිෂ්පාදන ලක්ෂණ මත රඳා පවතී. ඒවායේ පුළුල් භාවිතය අධික පිරිවැය, සමහර ආහාර නිෂ්පාදනවල ගුණාත්මක භාවයට අහිතකර බලපෑම් හෝ ප්රමාණවත් එන්සයිම අක්රිය වීම මගින් සීමා වේ.13,14
පළතුරු යුෂ ස්ථාවර කිරීමට සහ පැහැදිලි කිරීමට ලැකේස් භාවිතා කළ හැකිය.15ගොක්මන් සහ තවත් අය.16පළතුරු යුෂ පැහැදිලි කිරීම සඳහා ලැකේස් භාවිතය නිර්දේශ කරයි, මන්ද එය ෆීනෝලික් සංයෝග ඵලදායී ලෙස ඉවත් කරන්නේ ඒවා ඕනෑම අල්ට්රාෆිල්ටරේෂන් පටලයකින් පහසුවෙන් ඉවත් කළ හැකි පොලිමර් හෝ ඔලිගෝමර් බවට පරිවර්තනය කිරීමෙනි, එමඟින් ඇපල් යුෂ 50°C දී සති හයක් දක්වා ස්ථායී වර්ණය සහ පැහැදිලි බව පවත්වා ගැනීමට ඉඩ සලසයි. පිරිසිදු කරන ලද *ට්රයිකොඩර්මා* ලැකේස් ඇලුමිනා පබළු මත නිශ්චල කර ඇපල් යුෂ වල ක්ෂුද්රජීවී දූෂණය නිසා ඇති වන රසයෙන් තොර සංයෝග තෝරා බේරා ඉවත් කිරීමට භාවිතා කරන ලදී.17
ඇපල් යුෂ වල වාෂ්පශීලී සංරචක වලින් ආසන්න වශයෙන් 80-90% ක් එස්ටර සහ ඇල්ඩිහයිඩ් වන අතර එමඟින් යුෂ වලට අද්විතීය සුවඳක් ලබා දේ.18*Trametes versicolor* වලින් ලැකේස්, ඇපල් යුෂ පැහැදිලි කිරීම සඳහා තරුණ පොල් කටු වලින් සාදන ලද ස්වභාවික තන්තු වලින් සාදන ලද මිල අඩු ආධාරකයක් මත නිශ්චල කරන ලදී.19පෙර අධ්යයනයන් මගින් එන්සයිම-නිදහස් හෝ නිශ්චලතා ක්රම භාවිතයෙන් හෝ අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් සමඟ ඒකාබද්ධව ඇපල් යුෂ (වර්ණය සහ කැළඹිලි බව) ස්ථායීකරණය කිරීම විමර්ශනය කර ඇත.5,19 මාත්රාවකෙසේ වෙතත්, ගබඩා කිරීමේදී ඇපල් යුෂ වල භෞතික රසායනික ගුණාංග කෙරෙහි දිලීර ලැකේස් වල බලපෑම තවමත් පැහැදිලි නැත. එබැවින්, මෙම අධ්යයනයේ අරමුණ වූයේ දිලීර ලැකේස් සමඟ ප්රතිකාර කිරීමෙන් සහ සති දෙකක ශීත කළ ගබඩා කිරීමෙන් පසු ඇපල් යුෂ වල භෞතික රසායනික ගුණාංග, ෆීනෝලික් සංයෝග අන්තර්ගතය සහ ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වයේ වෙනස්කම් අත්හදා බැලීමයි. ලැකේස් වලට ෆීනෝලික් සංයෝග ඔක්සිකරණය කිරීමේ හැකියාව ඇති අතර, එමඟින් යුෂ පැහැදිලි කිරීම ඇතුළු විවිධ කාර්මික ක්රියාවලීන්හි භාවිතය සඳහා ඒවා පොරොන්දු වේ. මෙම අධ්යයනය *Pleurotus ostreatus* NRC 620 හි ලැකේස් පරීක්ෂා කළ අතර, ඒවායේ ක්රියාකාරිත්වය සඳහා කදිම කොන්දේසි සහ යුෂ පැහැදිලි කිරීමේදී කාර්යක්ෂමතාව කෙරෙහි අවධානය යොමු කළේය. බෙල්ලන් හතු (P. ostreatus NRC 620) පිළිබඳ පර්යේෂණ තවමත් සීමිත වුවද, පෙර අධ්යයනයන් Trametes versicolor සහ Ganoderma lucidum වැනි විවිධ දිලීර ප්රභවයන්ගෙන් එන්සයිම පරීක්ෂා කර ඇත. මෙම අධ්යයනයේ අරමුණ වූයේ ආහාර කර්මාන්තයේ මෙම එන්සයිමයේ විභව යෙදුම ඇගයීම සහ එහි අද්විතීය ගුණාංග, විශේෂයෙන් එහි පරමාදර්ශී pH අගය සහ උෂ්ණත්වය ඉස්මතු කිරීමයි.
2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) සිග්මා-ඇල්ඩ්රිච් (කැනඩාව) වෙතින් මිලදී ගන්නා ලදී. අනෙකුත් සියලුම ප්රතික්රියාකාරක විශ්ලේෂණාත්මක ශ්රේණියේ විය.
ජාතික පර්යේෂණ මධ්යස්ථානයේ ක්ෂුද්රජීවී සංස්කෘතික එකතු කිරීමේ මධ්යස්ථානය විසින් දන්නා බෙල්ලන් හතු වික්රියාව NRC620 ලබා ගන්නා ලදී. උප සංස්කෘතියෙන් පසුව, මෙම වික්රියාව අර්තාපල් ඩෙක්ස්ට්රෝස් ඒගාර් ස්ලැන්ට් මත 4°C දී ගබඩා කරන ලදී. ඉනොකියුලම් සකස් කිරීමේ ක්රමය පහත පරිදි විය: දින 10ක් වයසැති, සම්පූර්ණයෙන්ම වර්ධනය වූ මයිසිලියම් අර්තාපල් ඩෙක්ස්ට්රෝස් ඒගාර් තහඩු මතට එන්නත් කර 28°C දී පුර්ව ලියාපදිංචි කරන ලදී. දින 10කට පසු, වඳ ලෝහ පන්ච් එකක් භාවිතයෙන් ඒගාර් මාධ්යයෙන් 12-මිලිමීටර්-විෂ්කම්භය සහිත මයිසීලියල් කුට්ටි තුනක් ඉවත් කර විෂබීජහරණය කළ සංස්කෘතික මාධ්යයේ මිලි ලීටර් 50ක් (pH 5.0, කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි ඔත්මන් සහ වෙනත් අය විසින් විස්තර කරන ලද පරිදි) අඩංගු කපු ප්ලග් සහිත 250-මිලිලීටර් එර්ලන්මෙයර් ෆ්ලාස්ක් තුළ තබන ලදී.20). සංස්කෘතීන් දින 18ක් 28°C උෂ්ණත්වයකදී පුර්ව ගන්වන ලදී. ඉන්පසු සංස්කෘතීන් Whatman අංක 1 පෙරහන් කඩදාසිය හරහා පෙරන ලද අතර, එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස ලැබෙන සුපිරි ද්රව්ය එන්සයිම ප්රභවය ලෙස සේවය කළේය.
ABTS උපස්ථරයක් ලෙස භාවිතා කරමින් ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වය තීරණය කරන ලදී. ප්රතික්රියා මිශ්රණයේ (මිලි ලීටර් 2) 0.3 mM ABTS 500 μL (0.1 M සෝඩියම් සයිටේ්රට් බෆරයේ, pH අගය 4.5 හි දියකර ඇත) සහ ආසවනය කළ ජලය සමඟ තනුක කරන ලද එන්සයිම සාම්පලයේ අවශ්ය ප්රමාණය අඩංගු විය.21,22කාමර උෂ්ණත්වයේ දී (28 °C ± 2) ලැකේස් ABTS ඔක්සිකරණය කළ හැකි බව සලකන විට, 420 nm (ε) දී අවශෝෂණයේ වැඩිවීම මැනීමෙන් ABTS ඔක්සිකරණය තීරණය කරන ලදී.420 (420)= 36,000 සෙ.මී.-1 M -1) Agilent Carry-100 UV වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් භාවිතා කරමින්. මිනිත්තුවකට 1 μmol ABTS ඔක්සිකරණය කිරීම සඳහා ලැකේස් ක්රියාකාරකම් ඒකකයක් අවශ්ය විය. අභ්යන්තර පාලනයක් ලෙස ගව සෙරුම් ඇල්බියුමින් භාවිතා කරමින් බ්රැඩ්ෆර්ඩ් ක්රමය මගින් ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය තීරණය කරන ලදී.23,24
බෙල්ලන් හතු වික්රියා NRC 620 වෙතින් එන්සයිමය ලබා ගැනීමෙන් පසු, එහි ක්රියාකාරිත්වය විවිධ වගා කාල පරතරයන්හිදී දින 25 ක් ස්ථිතික තත්වයන් යටතේ 28 °C දී මනිනු ලැබීය.
ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයට උෂ්ණත්වයේ බලපෑම අධ්යයනය කිරීම සඳහා, 20 සිට 90 °C දක්වා උෂ්ණත්ව පරාසය තුළ අත්හදා බැලීම් සිදු කරන ලදී. එන්සයිම එකතු කර ප්රතික්රියාව ආරම්භ කිරීමට පෙර, බෆරය (0.1 M සෝඩියම් සයිටේ්රට්, pH 4.5) සහ උපස්ථරය (ABTS) මිශ්ර කර විවිධ උෂ්ණත්වවලදී මිනිත්තු 5 ක් පුර්ව ලියාපදිංචි කරන ලදී. එන්සයිම තාප ස්ථායිතාව 40, 50, 60 සහ 70 °C දී 0.05 M සෝඩියම් පොස්පේට් බෆරයේ (pH 7.0) පිළිවෙලින් පැය 2 ක් පුර්ව ලියාපදිංචි කිරීමෙන් තක්සේරු කරන ලදී. පසුව ABTS උපස්ථරය භාවිතයෙන් අවශේෂ ක්රියාකාරකම් තක්සේරු කරන ලදී.
2.5 සිට 7.0 දක්වා pH පරාසයක් සහිත 0.1 M සයිටේ්රට්-පොස්පේට් බෆරවල උපස්ථරයක් ලෙස ABTS භාවිතා කරමින් ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයට pH හි බලපෑම තක්සේරු කරන ලදී. pH ස්ථායිතාව තක්සේරු කිරීම සඳහා එන්සයිම ද්රාවණය 0.1 M සයිටේ්රට් සහ ට්රිස් බෆරවල (pH 3, 4, 6, සහ 7) පැය දෙකක් 40°C දී පුර්ව ලියාපදිංචි කරන ලදී. උපස්ථරයක් ලෙස ABTS සමඟ ඉතිරි ක්රියාකාරකම් පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීමෙන් පසුව ගණනය කරන ලදී.
ලැකේස් එක සෝඩියම් පොස්පේට් බෆරයේ (0.05 M, pH 7.0) විනාඩි 10ක් විවිධ ලෝහ අයන (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, සහ Mn2+) අඩංගු වන අතර පිළිවෙලින් 2.5 mM සහ 10 mM සාන්ද්රණයකින් තැන්පත් කරන ලදී. ඉන්පසු ප්රතික්රියාව ආරම්භ කිරීම සඳහා උපස්ථරය (ABTS) එකතු කරන ලද අතර සාපේක්ෂ ක්රියාකාරිත්වය තක්සේරු කරන ලදී.
චාලක පරාමිතීන් (Vmax සහ Km) තීරණය කිරීම සඳහා විවිධ සාන්ද්රණයන්හිදී (0.025–3 mM) ලැකේස් මගින් ABTS ඔක්සිකරණය pH අගය 4.5 හිදී මනිනු ලැබීය. චාලකනියතයන්මයිකලිස්-මෙන්ටන් සමීකරණයේ, උපස්ථර සාන්ද්රණයේ ශ්රිතයක් ලෙස ප්රතික්රියා අනුපාතයේ අන්යෝන්ය අගය සටහන් කරන ලයින්වීවර්-බර්ක් ප්රස්ථාරයක් භාවිතයෙන් ගණනය කරන ලදී. චාලක නියතයන් ග්රැෆ්පැඩ් ප්රිස්ම් අනුවාදය 6.01 මෘදුකාංගය භාවිතයෙන් ලයින්වීවර්-බර්ක් ප්රස්ථාරයෙන් ගණනය කරන ලදී.
ඇපල් හොඳින් ටැප් වතුරෙන් සේදීමෙන් පසු, ඒවා අඩකින් කපා සම්පූර්ණයෙන්ම ස්වයංක්රීය Braun MP80 ඇපල් ජූසර් (ජර්මනියේ නිෂ්පාදිත) භාවිතයෙන් යුෂ කරන ලදී. චීස්ක්ලෝත් ස්ථර හතරක් හරහා යුෂ පෙරන ලදී. පාලන කණ්ඩායමට එන්සයිම එකතු නොකළ අතර, 2.0% ලැකේස් (පරීක්ෂා කරන ලද වඩාත්ම ඵලදායී සාන්ද්රණය) නැවුම්ව සකස් කරන ලද ඇපල් යුෂ වලට එකතු කරන ලද අතර, එය සති දෙකක් සඳහා 4°C හි ගබඩා කරන ලදී.
ටයිට්රේටබල් ආම්ලිකතාවය (TA) සහ pH අගය තීරණය කරන ලද්දේ Boulton et. ගේ ක්රමයට අනුවය.අල්.27. එක් එක් සාම්පලයේ pH අගය ඩිජිටල් pH මීටරයක් (JENWAY 3510 pH මීටරය) භාවිතයෙන් මනිනු ලැබීය. පහත සූත්රය භාවිතා කරමින් මැලික් අම්ලය මත පදනම්ව ටයිට්රේටබල් ආම්ලිකතාවය (TA) ගණනය කරන ලදී.
මෙහි V සහ C යනු අනුමාපනයේදී භාවිතා කරන සෝඩියම් හයිඩ්රොක්සයිඩ් ද්රාවණයේ පරිමාව (mL) සහ සාන්ද්රණය (0.1 mol/L) පිළිවෙලින් වේ. K යනු මැලික් අම්ල පරිවර්තන සංගුණකය වන අතර එය 0.067 ට සමාන වන අතර W යනු ඇපල් යුෂ වල ස්කන්ධය (g) වේ.
මුළු ද්රාව්ය ඝන ද්රව්ය (ටීඩීඑස්) සියලුම යුෂ සාම්පලවල අන්තර්ගතය PAL-1 සාක්කු වර්තනමානයක් (ATAGO, ටෝකියෝ, ජපානය) භාවිතයෙන් තීරණය කරන ලදී. එක් එක් මිනුමෙන් පසු, දෘශ්ය කාචය අයනීකරණය කළ ජලයෙන් සෝදා, සෑම ඇපල් යුෂ සාම්පලයක්ම තුන් වරක් පරීක්ෂා කරන ලදී. එක් එක් සාම්පලයේ අගය ගණනය කරන ලද්දේ මිනුම් තුනේ සාමාන්යකරණයෙනි. එක් එක් ඇපල් යුෂ සාම්පලය සඳහා මධ්යන්ය ± සම්මත අපගමනය ද මෙම ප්රතිඵල සාමාන්යකරණය කිරීමෙන් ගණනය කරන ලදී.
ඇපල් යුෂ සාම්පලවල දුස්ස්රාවීතාවය භ්රමණ දුස්ස්රාවීතාවයේ ප්රත්යාස්ථතාව තක්සේරු කරන ලද්දේ භ්රමණ දුස්ස්රාවීතාවයේ "S2" සිලින්ඩරය තුළ ය. නියැදිය විස්කෝමීටරයේ "S2" සිලින්ඩරය තුළ තබා ඇත. දෘශ්ය දුස්ස්රාවීතාවය ෂියර් ආතතියේ බෑවුමට එදිරිව ෂියර් අනුපාත වක්රයෙන් නිරූපණය කරන ලද අතර එය ෂියර් ආතතියෙන් සහ විවිධ ෂියර් අනුපාතවලින් (1.00 සිට 437.4 s⁻¹ දක්වා) අනුරූප වක්රවලින් ගණනය කරන ලදී. දෘශ්ය දුස්ස්රාවීතාවය ගණනය කිරීමේ සූත්රය පහත පරිදි වේ:
මෙහි η යනු දෘශ්ය දුස්ස්රාවිතතාවය (cP), τ යනු කැපුම් ආතතිය (dyn/cm²), γ යනු කැපුම් අනුපාතය (sec⁻¹) වන අතර (τ) ගණනය කරනු ලබන්නේ පහත සූත්රය භාවිතයෙන් ව්යවර්ථය (α) සහ සිලින්ඩරය (Z) අගයන් භාවිතා කරමිනි: τ = Z. α.
දුඹුරු පැහැ ගැන්වීමේ දර්ශකය Meidavet ක්රමයට අනුව තීරණය කරන ලදීඅල්.29. 10-ml යුෂ සාම්පලයක් මිනිත්තු 10 ක් සඳහා 2750 xg දී කේන්ද්රාපසාරී කරන ලදී. යුෂ සුපර්නේටන්ට් මිලි ලීටර් 5 ක් 95% එතනෝල් මිලි ලීටර් 5 ක් සමඟ මිශ්ර කරන ලදී. ෂිමාඩ්සු UV වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් (UV-1601 PC) භාවිතයෙන් මිශ්රණයේ අවශෝෂණය 420 nm දී මනිනු ලැබීය.
Boulton et al විසින් විස්තර කරන ලද පරිදි Folin-Ciocalteu ප්රතික්රියාකාරකය භාවිතයෙන් මුළු ෆීනෝලික් අන්තර්ගතය (TPC) වර්ණමිතිකව තීරණය කරන ලදී.[27]]. 0 සිට 500 mg/L දක්වා සාන්ද්රණයන් සඳහා ගැලික් අම්ලයේ සම්මත වක්රයක් ගොඩනගා ඇත (ආර්²= 0.997). ප්රතිඵල ගැලික් අම්ල සමානකම් (mg GAE/mL) ලෙස ප්රකාශ වේ.
ඇපල් යුෂ 25 μL ට ආසවනය කළ ජලය 125 μL සහ FRAP ද්රාවණය 2850 μL එකතු කර මිශ්රණය අඳුරු තැනක තබන්න.30මිනි. ඉන්පසු ෂිමාඩ්සු UV වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් (UV-1601 PC) භාවිතයෙන් 593 nm හි අවශෝෂණය මැන බලන්න. FRAP ප්රතික්රියාකාරකය 300 mM ඇසිටේට් බෆරය (pH 3.6), 20 mM යකඩ(III) ක්ලෝරයිඩ් සහ 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (40 mM HCl හි දියකර) 10:1:1 අනුපාතයකින් මිශ්ර කිරීමෙන් සකස් කරන ලදී. ට්රොලොක්ස් ප්රමිතිය ලෙස භාවිතා කරමින් සම්මත වක්රයක් ජනනය කරන ලදී (ර²= 0.999), සහ ප්රතිඵල μM ට්රොලොක්ස්/මිලි ලීටර් ලෙස ප්රකාශ වේ.
ප්රතිකාර කළ සහ ප්රතිකාර නොකළ යුෂ වල ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය තීරණය කරනු ලැබුවේ DPPH ක්රමය භාවිතා කර DPPH නිදහස් රැඩිකලුන් ඉවත් කිරීමේ හැකියාව තක්සේරු කිරීම සඳහා ය.31යුෂ මයික්රොලීටර් දහයක් මෙතනෝල් හි DPPH ද්රාවණයක (100 μM) මිලි ලීටර් 1 ක් සමඟ මිශ්ර කරන ලදී. මිනිත්තු 30 ක් අඳුරේ ප්රතික්රියා කිරීමෙන් පසු, ෂිමාඩ්සු UV වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් (UV-1601 PC) භාවිතයෙන් මිශ්රණයේ අවශෝෂණය 517 nm හිදී මනිනු ලැබීය. ක්රමාංකන වක්රයක් මත පදනම්ව ට්රොලොක්ස් සමාන (μM ට්රොලොක්ස්/මිලි) ලෙස ප්රතිඵල ප්රකාශ කරන ලදී (R2= 0.990).
ලබාගත් දත්තවලින් පෙනී ගියේ පැසවීමේ 18 වන දිනය අවසන් වන විට NRC 620 බෙල්ලන් හතු වල උපරිම ලැකේස් නිෂ්පාදනය නිරීක්ෂණය වූ බවත්, එය 1302 U/L ක්රියාකාරිත්වයක් කරා ළඟා වූ බවත්ය. ලැකේස් නිෂ්පාදනය සඳහා ප්රශස්ත වගා කාලය තීරණය කිරීම සඳහා මෙය පදනම ලෙස සේවය කළේය (රූපය 1). වගා කාලය වැඩි වීමත් සමඟ එන්සයිම නිෂ්පාදනය වැඩි වුවද, වැඩිවීමේ අනුපාතය වගා කාලයට සෘජුවම සමානුපාතික නොවීය; දින 21 කට පසු, එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය 90 U/L කින් පමණක් (1390 U/L දක්වා) වැඩි වී තිබුණි. එබැවින්, වගා කාලය වැඩි වීමේ ආර්ථික ප්රතිලාභ සමඟ නිෂ්පාදන අස්වැන්න සමතුලිත කිරීම සඳහා ප්රශස්ත වගා කාලය ලෙස අවසානයේ දින 18 තෝරා ගන්නා ලදී.
ප්ලූරෝටස් ඔස්ට්රේටස් NRC 620 හි ලැකේස් අස්වැන්න කෙරෙහි වගා කාලයෙහි බලපෑම. දිලීර මයිසීලියල් කුට්ටි තුනක් (මි.මී. 12) විෂබීජහරණය කළ මාධ්ය මිලි ලීටර් 50 කට එන්නත් කර පසුව විවිධ කාලවලදී 28 °C දී වගා කරන ලදී.
අනෙකුත් අධ්යයනයන් හා අනුකූලව, අපගේ ප්රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ දිලීර මගින් උපරිම ලැකේස් ස්රාවය ලබා ගැනීම සඳහා කදිම වගා කාලය දින 7 ත් 36 ත් අතර විය හැකි බවයි.32එසික් සහ වෙනත් අයට අනුව.33, *Trametes polyzona* WRF03 පැසවීමේ නවවන දිනය අවසන් වන විට ඉහළම ලැකේස් ප්රමාණය නිපදවූ අතර, නිශ්චිත ක්රියාකාරිත්වය 1637 U/mg ප්රෝටීන් විය. තවද, Othman et al.34*ට්රයිකොඩර්මා හර්සියානම්* S7113 වගාවේ පස්වන දිනයේදී ලැකේස් විශාල ප්රමාණයක් ස්රාවය කරන බව සොයා ගන්නා ලදී. ලැකේස් නිෂ්පාදන අනුපාතය දහහතරවන දින උපරිම ක්රියාකාරිත්වයකට ළඟා වූ අතර පසුව ක්රමයෙන් අඩු විය.34ප්රධාන වර්ධන අවධියේදී එන්සයිම ස්රාවය සිදුවිය හැකි වුවද, එය සාමාන්යයෙන් අතරමැදි අවධියේදී උපරිමයට පැමිණෙන අතර කාබන් හෝ නයිට්රජන් ප්රභවයක් පරිභෝජනය කිරීමෙන් අවුලුවනු ලැබේ.34,35
Pleurotus ostreatus NRC 620 හි ලැකේස් 50°C සිට 80°C දක්වා පුළුල් උෂ්ණත්ව පරාසයක් තුළ ඉහළ ක්රියාකාරිත්වයක් පෙන්නුම් කළද, උපරිම ක්රියාකාරිත්වයට (69–98%) ආසන්න වුවද, එහි උපරිම ක්රියාකාරිත්වය 70°C දී නිරීක්ෂණය විය (රූපය 2a). මෙම උෂ්ණත්ව පරාසයෙන් පිටත, එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය ආසන්න වශයෙන් 70°C දී අඩු විය. මෙම ප්රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ එන්සයිම ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී ක්රියාකාරී වන බවයි, බොහෝ විට ඉහළ උෂ්ණත්වය ප්රතික්රියාවේ චාලක ශක්තිය වැඩි කරන බැවිනි.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 හි ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයට ප්රතික්රියා උෂ්ණත්වය (a) සහ pH (b) වල බලපෑම. එන්සයිම එකතු කර ප්රතික්රියාව ආරම්භ කිරීමට පෙර මිනිත්තු 5 ක් විවිධ උෂ්ණත්වවලදී මිශ්රණය පූර්ව-ඉන්කියුබේට් කිරීමෙන් 20 සිට 90 °C දක්වා උෂ්ණත්වයන් ලබා ගන්නා ලදී. 2.5 සිට 7.0 දක්වා pH පරාසයක් තුළ 0.1 M සයිටේ්රට්-පොස්පේට් බෆරයක් අඩංගු ද්රාවණවල උපස්ථරයක් ලෙස ABTS භාවිතා කරමින් ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයට pH හි බලපෑම තක්සේරු කරන ලදී.
Ezike et ට අනුවඅල්.33, *Trametes polyzona* WRF03 ලැකේස් සඳහා ප්රශස්ත උෂ්ණත්වය 55 °C වන අතර, එය *Ganoderma lucidum* සඳහා වන උෂ්ණත්වයට සමාන වේ.ලැකේස්36සහ *Trametes polyzona* KU-RNW02737 සඳහා ප්රශස්ත උෂ්ණත්වයට (50 °C) සමාන වේ.ලැකේස් . බැල්ඩ්රියන්38අනෙකුත් ලිග්නින්-හායන එන්සයිම පද්ධති සඳහා, ලැකේස් සඳහා කදිම උෂ්ණත්ව පරාසය 50 සහ 70 °C අතර බව සටහන් කරයි.
ප්රතිඵලවලින් පෙනී ගියේ එන්සයිම pH අගය 3.0 දී ඉහළම ක්රියාකාරිත්වය පෙන්නුම් කළ බවත්, pH අගය 3.5 දී 94% ක ක්රියාකාරිත්වයක් ළඟා වූ බවත්ය. කෙසේ වෙතත්, එය 2.5 සිට 7.0 දක්වා පුළුල් pH පරාසයක් තුළ ක්රියාකාරීව පැවති බවයි (රූපය 2b). තවද, උදාසීන හෝ ක්ෂාරීය තත්වයන්ට සාපේක්ෂව ආම්ලික තත්වයන් තුළ එය ඉහළ ක්රියාකාරිත්වයක් පෙන්නුම් කළේය. එහි ක්රියාකාරිත්වය 2.5 සිට 4.5 දක්වා pH පරාසයට වඩා අවම වශයෙන් 77% ක් පැවතුනද, pH අගය 7.0 දී ආසන්න වශයෙන් 38% ක් පමණි. *Trametes polyzona* WRF03 වෙතින් ලැකේස් සඳහා ප්රශස්ත pH අගය 4.533 ක් වූ අතර එය *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, සහ *Trametes hirsuta* 41 වෙතින් ලැකේස් සඳහා pH අගයට සමාන වේ. කෙසේ වෙතත්, Chairin et al විසින් කරන ලද අධ්යයනයට අනුව.42, *Polymorpha f. sp.* WR710-1 සිට ලැකේස් සඳහා ප්රශස්ත pH අගය 2.2 වන අතර, *Polymorpha f. sp.* IBL-04 සිට ලැකේස් සඳහා ප්රශස්ත pH අගය 5.043 වේ. හයිඩ්රොක්සයිඩ් ඇනායන (ලැකේස් නිෂේධකය) T2/T3 ලැකේස් වල තඹ පරමාණු වලට බන්ධනය වීම උදාසීන හෝ ක්ෂාරීය pH තත්වයන් යටතේ ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වය අඩුවීමට හේතුව විය හැකිය. මෙය T1 මධ්යස්ථානයේ සිට T2/T3 මධ්යස්ථානයට අභ්යන්තර ඉලෙක්ට්රෝන හුවමාරුව කඩාකප්පල් කළ හැකි අතර එමඟින්සීමා කිරීමඑන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය23,44
විවිධ උෂ්ණත්වවලදී එන්සයිම ඉන්කියුබේට් කිරීමෙන්, ඉන්කියුබේෂන් කාලය සහ උෂ්ණත්වය යන දෙකම එන්සයිම ස්ථායිතාවයට බලපාන බව සොයා ගන්නා ලදී. විශේෂයෙන්, *Trametes polyzona* NRC 620 හි ලැකේස් 40℃ සහ 50℃ හි ඉහළ ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කළ අතර, මිනිත්තු 120 කට පසු එහි ආරම්භක ක්රියාකාරිත්වයෙන් පිළිවෙලින් 68.33% සහ 59.61% ක් රඳවා ගත්තේය (රූපය 3a). ඊට වෙනස්ව, එකම තත්වයන් යටතේ (40℃ සහ 50℃, මිනිත්තු 120), *Trametes polyzona* WRF03 හි ලැකේස් පිළිවෙලින් එහි ක්රියාකාරිත්වයෙන් 64.38% සහ 42.92% ක් රඳවා ගත්තේය.33ඊට පටහැනිව, පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කාලය සහ උෂ්ණත්වය වැඩි වීම *Trametes polyzona* NRC 620 ලැකේස් වල ස්ථායිතාව අඩු කළේය; 60℃ සහ 70℃ උෂ්ණත්වයකදී මිනිත්තු 60ක් පුර්ව ලියාපදිංචි කිරීමෙන් පසු, එහි ක්රියාකාරිත්වය පිළිවෙලින් 39.24% සහ 1.72% දක්වා අඩු විය (රූපය 3a). පර්යේෂණාත්මක ප්රතිඵලවලට අනුකූලව, *Trametes polyzona* WRF03 හි ලැකේස් තාප පිරියම් කිරීමේ ක්රියාවලිය පුරාවට 40 සහ 50℃ හි ඉහළ ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කළේය.33ඒ හා සමානව, ලුආන්ජාරොඑන්කිට් සහඅල්.37සහ චයිරින් සහ තවත් අයඅල්.42Trametes polyzona KURNW027 සහ Trametes polyzona WR710-1 වලින් ලැකේස් 50 °C දී පැය 1ක් සඳහා ස්ථායිතාව වාර්තා කළේය. විවිධ ජෛව තාක්ෂණික ක්ෂේත්රවල අදාළ වන ප්රයෝජනවත් ජෛව උත්ප්රේරකයක් ලෙස, ලැකේස් පුළුල් උෂ්ණත්ව පරාසයක් තුළ හොඳ ස්ථාවරත්වයක් සහ කාර්ය සාධනයක් තිබිය යුතුය.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 සිට ලැකේස් වල තාප ස්ථායීතාවය (a) සහ pH ස්ථායිතාව (b). 40, 50, 60 සහ 70 °C දී 0.05 M සෝඩියම් පොස්පේට් බෆරයේ (pH 7.0) එන්සයිම ද්රාවණය පිළිවෙළින් පැය 2 ක් සඳහා ඉන්කියුබේට් කිරීමෙන් තාප ස්ථායීතාවය තක්සේරු කරන ලදී. 40 °C දී 0.1 M සයිටේ්රට් බෆරයේ සහ ට්රිස් බෆරයේ (pH 3, 4, 6 සහ 7) එන්සයිම ද්රාවණය 2 ක් සඳහා ඉන්කියුබේට් කිරීමෙන් pH ස්ථායිතාව තක්සේරු කරන ලදී. ඉන්කියුබේෂන් කිරීමෙන් පසු ABTS උපස්ථරයක් ලෙස භාවිතා කරමින් අවශේෂ ක්රියාකාරකම් ගණනය කරන ලදී.
එන්සයිම භාවිතය සහ ගබඩා කිරීම සඳහා ප්රශස්ත තත්ත්වයන් තීරණය කිරීම සඳහා, ලැකේස් ස්ථායිතාවයට pH හි බලපෑම අපි විමර්ශනය කළෙමු. විවිධ pH අගයන්ට නිරාවරණය වීම ප්රෝටීන් ව්යුහයේ ස්ථායිතාවයට සැලකිය යුතු ලෙස බලපෑ අතර එමඟින් එන්සයිම අණුවේ ස්ථායිතාවයට සහ ක්රියාකාරිත්වයට බලපෑම් කළේය. ප්රතිඵලවලින් පෙන්නුම් කළේ ආම්ලික තත්වයන් යටතේ එන්සයිම අඩු ස්ථායීතාවයක් පෙන්නුම් කළ අතර ඉහළ pH අගයන්හිදී (උදාසීන සහ ක්ෂාරීය කලාප) වඩා හොඳ ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කළ බවයි. 7.0, 6.0, 4.0 සහ 3.0 pH අගයන්හිදී, මිනිත්තු 120 කට පසු එන්සයිම රඳවා ගැනීමේ අනුපාත පිළිවෙලින් 100%, 62.54%, 52.39% සහ 11.14% ක් පමණ විය (රූපය 3b). *Strombus multisus* WRF03 ලැකේස් උදාසීන pH අගයන්හිදී (5.5–6.5) ඉහළ ස්ථායිතාවයක් සහ ආම්ලික pH අගයන්හිදී (4.0 ට අඩු) අඩු ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කළේය. 5.5, 6.0 සහ 6.5 pH අගයන්හිදී මිනිත්තු 120 කට පසු, එන්සයිම රඳවා ගැනීමේ අනුපාත පිළිවෙලින් 82%, 100% සහ 93% ක් පමණ විය.33කයිරින් සහ තවත් අය.42Trametes polyzona WR710-1 හි ලැකේස් 6.0 සිට 7.0 දක්වා pH පරාසයක ස්ථායී බව සයිඩ් සහ වෙනත් අය සඳහන් කළ අතර.45උදාසීන pH තත්ත්ව යටතේ ලැකේස් වඩාත් ස්ථායී බව පෙන්නුම් කළේය. කෙසේ වෙතත්, සෙරීනා යුනිකොලර් හි ලැකේස් ක්ෂාරීය තත්ත්ව යටතේ (pH 9.0) ස්ථායීතාවය පෙන්නුම් කළේය.46. අධ්යයනය කරන ලද ලැකේස් පුළුල් pH පරාසයක් තුළ ඉහළ ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කළේය. මෙය කාර්මික යෙදීම් සඳහා වැදගත් ලක්ෂණයක් විය හැකිය.
සමහර ලෝහ අයන එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වයට උත්තේජක සහ නිෂේධනීය බලපෑම් යන දෙකම ඇති බැවින්, කාර්මික යෙදීම් වලදී එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වයට ඒවායේ බලපෑම් සලකා බැලිය යුතුය. ලෝහ අයන යනු බාහිර සෛලීය එන්සයිමවල ස්ථායිතාව සහ සංස්ලේෂණයට බලපෑම් කළ හැකි පොදු පාරිසරික දූෂක වන බැවින් මෙය ඉතා වැදගත් වේ.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620 වෙතින් ලැකේස් මත බහු ලෝහ අයනවල බලපෑම් විමර්ශනය කිරීම සඳහා, අපි අනුරූප අත්හදා බැලීම් සිදු කළෙමු. රූපය 4 හි පෙන්වා ඇති පරිදි, භාවිතා කරන ලෝහ වර්ගය අනුව, ලෝහ අයන සාන්ද්රණය 2.5 mM සිට 10 mM දක්වා වැඩි කිරීම එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වයට අහිතකර ලෙස බලපෑවේය. උදාහරණයක් ලෙස,මිලිග්රෑම්⁺ , සම²⁺ , සින්²⁺, සහකු²⁺එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය උත්තේජනය කර සක්රීය කළ හැකි අතර,නා⁺ , මිලියන²⁺ , කහ⁺, සහකේ⁺එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය නිෂේධනය කළ හැකිය. 10 mM සාන්ද්රණයකදී, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 හි ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයේ වඩාත්ම ප්රබල සක්රියකාරක වූයේ Cu²⁺ සහ Mg²⁺ අයන වන අතර එය පිළිවෙලින් ආසන්න වශයෙන් 34% සහ 20% ක සක්රියකරණ උපාධියක් සපයයි. කෙසේ වෙතත්, 10 mM සාන්ද්රණයකදී, Ca²⁺ අයන ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයේ වඩාත්ම ප්රබල නිෂේධකය වූ අතර එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය ආසන්න වශයෙන් 60% කින් අඩු කරයි.
ප්ලූරෝටස් ඔස්ට්රේටස් NRC 620 ලැකේස් වල ක්රියාකාරිත්වයට ලෝහ අයන වල බලපෑම. 2.5 mM සහ 10 mM සාන්ද්රණයකින් විවිධ ලෝහ අයන අඩංගු සෝඩියම් පොස්පේට් බෆරයේ (0.05 M, pH 7.0) ලැකේස් විනාඩි 10 ක් පුර්ව තැන්පත් කරන ලදී. ඉන්පසු උපස්ථරය (ABTS) එකතු කිරීමෙන් ප්රතික්රියාව ආරම්භ කරන ලද අතර පසුව සාපේක්ෂ ක්රියාකාරිත්වය මනිනු ලැබීය.
අපගේ ප්රතිඵල Mg²⁺ සහ Cu²⁺ *Trametes polyzona* WRF03³ හි ක්රියාකාරිත්වය වැඩි දියුණු කරන බව සොයා ගත් අනෙකුත් කතුවරුන්ගේ ප්රතිඵල සමඟ අනුකූල වේ. Castaño et al.⁴⁸ සොයා ගත්තේ *Xylaria* sp. හි ලැකේස් තඹ අයන (Cu²⁺) මගින් යම් දුරකට උත්තේජනය වන බවයි. තවද, Foroutanfar et al.⁴⁹ සහ Si et al.⁵⁰ පිළිවෙලින් *Paraconiothyrium variabile* සහ *Trametes pubescens* හි ලැකේස් පිළිබඳව සමාන අධ්යයනයන් සිදු කළහ. මෙම එන්සයිමයේ II වර්ගයේ තඹ-බන්ධන අඩවිය (T2) දී ඇති සාන්ද්රණයකදී Cu²⁺ සමඟ සංතෘප්ත කළ හැකි අතර, එමඟින් ඉහළ Cu²⁺³⁹ සාන්ද්රණයකදී ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වය උත්තේජනය කිරීම පැහැදිලි කළ හැකිය. සුදු කුණු දිලීර ලැකේස් යනු බහු තඹ පරමාණු අඩංගු ඔක්සිඩේස් වන බැවින්, ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයට තඹ අයනවල බලපෑම් විවිධාකාර වන අතර උත්තේජක සහ නිෂේධනීය සිට උදාසීන දක්වා පරාසයක පවතී.⁵¹ ඊට වෙනස්ව, ෂෝ සහ වෙනත් අය. [52]වාර්තා කළාකු²⁺තායිවාන භූගත වේයන්ගේ (Odontotermes formosanus) ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වය නිෂේධනය කළේය. කෙසේ වෙතත්, සෙරීනා sp. HYB07 හි ලැකේස්[53]සහ ක්ලිටෝසයිබ් මැක්සිමා[54]තඹ අයන මගින් බලපෑමට ලක් නොවීය.
උපස්ථරයේ විශේෂත්වය එහි චාලක පරාමිතීන් (Km සහ Vmax) මගින් නිරූපණය කරන ලදී; එන්සයිමයට උපස්ථරයේ බන්ධන සම්බන්ධතාවය ශක්තිමත් වන තරමට, Km අගය අඩු වන අතර උපස්ථරයේ විශේෂත්වය වැඩි වේ.3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620 සිට ලැකේස් හි චාලක පරාමිතීන් (Km සහ Vmax) GraphPad Prism 6.0 මෘදුකාංගය භාවිතයෙන් Lineweaver-Burk සටහන සැලසුම් කිරීමෙන් තීරණය කරන ලදී (රූපය 5). ABTS උපස්ථරයක් ලෙස භාවිතා කරන විට, ප්රතිඵල 1.99 mM සහ 16217 μmol විය.මිනි⁻¹ එල්⁻¹,පිළිවෙලින්. එල්සයිඩ් සහ තවත් අය.21ABTS ඔක්සිකරණය සඳහා Km අගයන් පිළිවෙලින් 0.1 mM සහ 0.064 mM බව වාර්තා කළ අතර, එය ABTS සඳහා Lac A සහ Lac B සමස්ථානිකවල ඉහළ සම්බන්ධතාවයක් පෙන්නුම් කරයි. තවද, Vmax අගයන් 0.182 μmol විය.මිනි⁻¹සහ 0.603 μmolමිනි⁻¹පිළිවෙලින්. ලබාගත් Km අගය Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM) ට වඩා අඩු විය; තවද, ඒවායේ Vmax අගය (1429 mmol min⁻¹) ද විය.පහළABTS උපස්ථරයක් ලෙස භාවිතා කරන විට.33 ඒ හා සමානව, Lentinus squarosulus MR13 සහ Trametes sp හි Km අගයන්. AH28-2 ලැකේස් සාන්ද්රණය පිළිවෙලින් 0.0714 mM සහ 0.025 mM වූ අතර Vmax අගයන් 0.0091 mM min−1 සහ 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS ට සාපේක්ෂව) විය.පිළිවෙලින්.56,57
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 සිට ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වයට ABTS සාන්ද්රණයේ බලපෑම විමර්ශනය කරන ලද අතර, ආරම්භක ප්රතික්රියා ප්රවේගයේ සහ ABTS සාන්ද්රණයේ අන්යෝන්ය රේඛාවේ Lineweaver-Burk සටහනක් සටහන් කරන ලදී. චාලක පරාමිතීන් (Vmax සහ Km) තීරණය කිරීම සඳහා විවිධ සාන්ද්රණයන් (0.025–3.0 mM) සහිත ලැකේස් හි ඔක්සිකරණ ප්රතික්රියාව pH 4.5 කින් මනිනු ලැබීය. මයිකලිස්-මෙන්ටන් චාලක නියතයන් උපස්ථර සාන්ද්රණයට එරෙහිව ප්රතික්රියා ප්රවේගයේ අන්යෝන්ය රේඛාවේ Lineweaver-Burk සටහන භාවිතයෙන් ගණනය කරන ලදී. GraphPad Prism 6.01 මෘදුකාංගය භාවිතයෙන් Lineweaver-Burk සටහනෙන් චාලක නියතයන් ගණනය කරන ලදී.
පෙක්ටිනේස් වැනි සාම්ප්රදායික පැහැදිලි කිරීමේ එන්සයිම, පෙක්ටික් ද්රව්ය ජල විච්ඡේදනය කර, දුස්ස්රාවීතාවය සහ කැළඹිලි බව අඩු කරයි. ඒවා ව්යුහාත්මක පොලිසැකරයිඩ ඵලදායී ලෙස බිඳ දමන අතර අස්වැන්න සහ පැහැදිලි බව වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා සෙලියුලේස් සහ හෙමිසෙලියුලේස් වැනි අනෙකුත් එන්සයිම සමඟ ඒකාබද්ධව බොහෝ විට භාවිතා වේ. කෙසේ වෙතත්, පෙක්ටිනේස් විශේෂයෙන් ඇපල් සහ මිදි යුෂ වැනි යුෂ වල කැළඹිලි බව සහ ඔක්සිකාරක දුඹුරු පැහැයට ප්රධාන දායක වන ෆීනෝලික් සංයෝග ඉලක්ක නොකරයි.58ඊට වෙනස්ව, ලැකේස් ෆීනෝලික් සංයෝග ඔක්සිකරණය උත්ප්රේරණය කරයි, ඒවා අවසාදිතකරණය හෝ පෙරීම මගින් ඉවත් කළ හැකි විශාල, දිය නොවන අණු බවට බහුඅවයවීකරණය කරයි. මෙම යාන්ත්රණය පැහැදිලි බව වැඩි දියුණු කරනවා පමණක් නොව, ෆීනෝලික් සංයෝග නිසා ඇතිවන ඔක්සිකාරක දුඹුරු පැහැ ගැන්වීමේ සම්භාවිතාව අඩු කිරීමෙන් යුෂ වල ආයු කාලය දීර්ඝ කරයි. තවද, ලැකේස් මත පදනම් වූ පැහැදිලි කිරීමේ ක්රියාවලීන් මෘදු සැකසුම් තත්වයන් යටතේ සිදු කළ හැකිය (pH 3.5–5.5, උෂ්ණත්වය 25–40 °C), ඒවායේ පෝෂණ හෝ කාබනික ගුණාංගවලට හානි නොකර සියුම් යුෂ සඳහා සුදුසු වේ.59අධ්යයනවලින් පෙන්වා දී ඇත්තේ පෙක්ටිනේස් ප්රතිකාරය පැය 1-2 කින් යුෂ පැහැදිලි කළ හැකි බවත්, ලැකේස් ප්රතිකාරය සාමාන්යයෙන් ෆීනෝලික් සංයෝග සම්පූර්ණයෙන්ම අඩු කිරීම සඳහා දිගු ප්රතික්රියා කාලයක් (පැය 3-6) අවශ්ය වන බවත්ය. කෙසේ වෙතත්, එන්සයිම නිශ්චල කිරීමෙන් හෝ ලැකේස් යාන්ත්රික පැහැදිලි කිරීමේ ක්රම සමඟ ඒකාබද්ධ කිරීමෙන් මෙම ක්රියාවලිය ප්රශස්ත කළ හැකිය.60මෙම අධ්යයනයේ දී, අමු සාරයේ එන්සයිම පැතිකඩකරණය සැලකිය යුතු ලැකේස් සහ α-ඇමයිලේස් ක්රියාකාරකම් අනාවරණය කළ අතර, පෙක්ටිනේස් සහ සයිලනේස් ක්රියාකාරකම් අතිශයින් අඩු වූ අතර, සෙලියුලේස් ක්රියාකාරිත්වය අනාවරණය නොවීය. එමනිසා, කැළඹිලි ස්වභාවය සහ ෆීනෝලික් අන්තර්ගතය අඩුවීම ප්රධාන වශයෙන් ලැකේස් ක්රියාකාරිත්වය නිසා සිදු වූ අතර, දුස්ස්රාවිතතාවයේ වෙනස අර්ධ වශයෙන් ඇමයිලේස් ක්රියාකාරිත්වය නිසා විය හැකිය.
වගුව 1 මඟින් නැවුම්ව මිරිකා ගත් ඇපල් යුෂ සහ ලැකේස්-ප්රතිකාර කළ සාම්පලවල භෞතික රසායනික පරාමිතීන් පෙන්වයි. ප්රතිඵලවලින් පෙනී ගියේ නැවුම්ව මිරිකා ගත් ඇපල් යුෂ (71.59%) වල අස්වැන්න ලැකේස්-ප්රතිකාර කළ සාම්පලවලට (87.34%) වඩා අඩු බවයි. මෙම ප්රතිඵල පිල්නික් සහ ඔරේන්ජ් හි සොයාගැනීම් සමඟ අනුකූල වේ.61, පලතුරු සැකසීමේදී එන්සයිම භාවිතය යුෂ අස්වැන්න වැඩි කිරීමට, පෙරීම වැඩි දියුණු කිරීමට සහ සාන්ද්රණය සඳහා උසස් තත්ත්වයේ පැහැදිලි යුෂ ලබා ගත හැකි බව පෙන්වා දුන් අය. යුෂ අස්වැන්න වැඩිවීමට ප්රධාන වශයෙන් හේතු වන්නේ යුෂ වල ද්රාව්ය සීනිවල අන්තර්ගතය වැඩි වීමයි. පලතුරු වල එන්සයිම ජල විච්ඡේදනය අතරතුර, නිෂ්පාදනයේ සෛල බිත්තිවල මෙසොග්ලියා සහ පෙක්ටීන් විනාශ වී උදාසීන සීනි සහ අම්ල වැනි ද්රාව්ය ද්රව්ය බවට පරිවර්තනය වේ.62 . 62.එන්සයිම ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ වල pH අගය පාලන කාණ්ඩයට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස අඩු විය (P < 0.05), සහ ගබඩා කිරීමේදී කණ්ඩායම් දෙකෙහිම pH අගය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය (වගුව 1). මෙම ප්රතිඵල මාර්ක් සහ අනෙකුත් අයගේ ප්රතිඵලවලට අනුකූල වේ.63, තාප පිරියම් කිරීමෙන් පසු ගබඩා කිරීමෙන් පසු කජු පලතුරු යුෂ වල pH අගය අඩු වූ බව ඔහු සඳහන් කළේය. එන්සයිම ප්රතිකාරයෙන් පසු පෙක්ටීන් හායනය සහ ගැලැක්ටුරෝනික් අම්ලය සෑදීම ගබඩා කිරීමේදී pH අගය වැඩිවීමට හේතු විය හැක. ගබඩා කිරීම පුරාවට එන්සයිම ප්රතිකාර කළ සාම්පලවල pH අගය 4.05 සහ 4.31 අතර පැවති අතර, ප්රතිකාර නොකළ ඇපල් යුෂ වල pH අගය 4.12 සහ 4.33 අතර පරාසයක පැවතුනි.
ප්රතිකාර නොකළ සහ ලැකේස් ප්රතිකාර කළ සාම්පල දෙකෙහිම මුළු ආම්ලිකතාවය (TA) ගබඩා කාලය වැඩි වීමත් සමඟ අඩුවීමේ ප්රවණතාවක් පෙන්නුම් කළේය (වගුව 1). ආම්ලිකතාවයේ අඩුවීමට හේතු වූයේ කාබනික අම්ල කාබෝහයිඩ්රේට් හෝ එන්සයිම ප්රතික්රියා බවට පරිවර්තනය වීම මෙන්ම යුෂ ගබඩා කිරීමේදී ඔක්සිකරණය වීමයි.64පාලන ඇපල් යුෂ සහ එන්සයිම ප්රතිකාර කළ සාම්පලවල මුළු ආම්ලිකතාවය අනෙකුත් යුෂ වලට වඩා අඩු විය (ස්ට්රෝබෙරි යුෂ 0.9%, ප්ලම් යුෂ 2.2%, කුම්කට් යුෂ 1.0%, ඇප්රිකොට් යුෂ 2.4%, තැඹිලි යුෂ 0.8%), නමුත් අනෙකුත් යුෂ වලට සමාන විය (උදා: පෙයාර්ස් යුෂ 0.3%).62ප්රතිකාර නොකළ නැවුම් මිරිකා ඇපල් යුෂ වල මෙම වෙනස්කම් වර්ධනය වන තත්වයන්, ජානමය සාධක, පරිණත මට්ටම සහ සැකසුම් ක්රම වැනි විවිධ සාධක නිසා විය හැකිය.65පාලන සහ ලැකේස්-ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ වල සම්පූර්ණ ආම්ලිකතාවයේ අඩුවීම සිං සහ වෙනත් අය විසින් ඉදිරිපත් කරන ලද ප්රතිඵලවලට අනුකූල වේ.66ජින් නුඕ ඇපල් යුෂ ගබඩා කිරීමෙන් දින 74 කට පසු එහි මුළු ආම්ලිකතාවය අඩුවීම සම්බන්ධයෙන්. අනෙක් අතට, ඔෂ්මියන්ස්කි සහ වොජ්ඩිලෝ67සාම්ප්රදායික පැහැදිලි කිරීමේ ක්රමවල බලපෑම අධ්යයනය කිරීමේදී ඇපල් යුෂ වල ආම්ලිකතාවයේ සැලකිය යුතු වෙනස්කම් කිසිවක් හමු නොවීය.
වගුව 1 හි ඉදිරිපත් කර ඇති ප්රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ ලැකේස් ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ වල මුළු ද්රාව්ය ඝන ද්රව්ය (TSS) අගය ප්රතිකාර නොකළ සාම්පලයට වඩා වැඩි බවයි. මෙම ප්රතිඵල ප්රකාශිත අධ්යයනයන් සමඟ අනුකූල වේ.. 68තවද, වගුව 1 හි දැක්වෙන්නේ පාලන ඇපල් යුෂ කාණ්ඩයේ TSS අගය ආරම්භක කාල ලක්ෂ්යයේදී 9.58 ක් වූ අතර ගබඩා කාලය අවසන් වන විට 11.05 දක්වා ළඟා වූ බවයි. මෙම අගයන් හමීඩ් සහ වෙනත් අය විසින් වාර්තා කරන ලද නැවුම් ඇපල් යුෂ වල TSS අගයන්ට වඩා අඩුය.. 69(පිළිවෙලින් 11.2 සහ 11.80). ලැකේස් ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ සාම්පලවල TSS අගය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි වූ අතර, 11.23 සිට ආරම්භ වී සති දෙකක 4°C උෂ්ණත්වයක ගබඩා කිරීමෙන් පසු 12.93 දක්වා ළඟා විය (වගුව 1). ගබඩා කිරීමේදී TSS හි සමාන වැඩිවීමක් සිට්රස් පලතුරු, ලෙමන් සහ පැණි දොඩම් වල ද දක්නට ලැබුණි. ගබඩා කිරීමේදී මුළු ද්රාව්ය ඝන ද්රව්ය (TSS) වැඩිවීමට හේතුව පොලිසැකරයිඩ (පිෂ්ඨය) මොනොසැකරයිඩ (සීනි) බවට ජල විච්ඡේදනය වීම, යුෂ විජලනය හේතුවෙන් සාන්ද්රණය වැඩි වීම සහ යුෂ වල පෙක්ටීන් ද්රාව්ය ඝන ද්රව්ය බවට පිරිහීම විය හැකිය. මුළු ද්රාව්ය ඝන ද්රව්ය (TSS) වැඩිවීමට හේතුව ද්රාව්ය සීනි වැඩි වීමයි, එය පිළිවෙලින් පෙක්ටින් හෝ සෙලියුලෝස් පෙක්ටින් හෝ සෙලියුලේස් මගින් ද්රාව්ය සීනි බවට පරිවර්තනය කිරීමෙන් හෝ හැමඩ් සහ වෙනත් අය වාර්තා කළ පරිදි පිෂ්ඨය සීනි බවට ජල විච්ඡේදනය කිරීමෙන් සෑදිය හැකිය.69.ලැකේස් ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ, ප්රතිකාර නොකළ යුෂ වලට වඩා හොඳ ප්රවාහ හැකියාවක් සහ අඩු දුස්ස්රාවීතාවයක් පෙන්නුම් කරන බැවින්, ඇපල් යුෂ වල ගුණාංග කෙරෙහි ලැකේස් වල බලපෑම දෘශ්යමය වශයෙන් නිරීක්ෂණය කළ හැකිය. මෙම නිරීක්ෂණය 1 වගුවේ සටහන් කර ඇත; එන්සයිම ප්රතිකාර කළ සාම්පලයේ දුස්ස්රාවීතාවය 1.87 cP වූ අතර, පාලන සාම්පලයේ දුස්ස්රාවීතාවය 2.95 cP විය. පෙක්ටීන් වැනි ද්රව්යවල ජල රඳවා ගැනීමේ ධාරිතාව වැඩි වීම සහ ඒකාබද්ධ ජාල ව්යුහයක් ගොඩනැගීම නිසා දුස්ස්රාවීතාවයේ මෙම සැලකිය යුතු අඩුවීමක් සිදුවිය හැකිය.
මෙම අධ්යයනයේ දී, වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් භාවිතයෙන් 420 nm හි අවශෝෂණය මැනීම මගින් ඇපල් යුෂ වල දුඹුරු පැහැ දර්ශකය (BI) මත ලැකේස් වල බලපෑම විමර්ශනය කරන ලදී. ප්රතිඵල වගුව 1 හි දක්වා ඇත. ගබඩා කිරීමේදී, ප්රතිකාර කළ සහ ප්රතිකාර නොකළ කණ්ඩායම් දෙකෙහිම ඇපල් යුෂ සාම්පලවල BI ක්රමයෙන් වැඩිවන ප්රවණතාවක් පෙන්නුම් කළේය. BI දුඹුරු පැහැ ගැන්වීමේ මට්ටම පිළිබිඹු කරන අතර එය ලෙස සේවය කළ හැකියවැදගත්එන්සයිමීය සහ එන්සයිමීය නොවන දුඹුරු පැහැ ගැන්වීමේ ප්රතික්රියා වල දර්ශකය. ගබඩා කිරීමේදී අවශෝෂණය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය (P < 0.05). ගබඩා කිරීම අවසානයේ,ඒ 420පාලන සහ එන්සයිම ප්රතිකාර කළ කණ්ඩායම්වල ඇපල් යුෂ සාම්පලවල වටිනාකම පිළිවෙලින් 217% සහ 121% කින් පමණ වැඩි විය (වගුව 1). ප්රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ එන්සයිම ප්රතිකාර මගින් දුඹුරු පැහැ ගැන්වීමේ මට්ටම 56% කින් පමණ ඵලදායී ලෙස අඩු කළ හැකි බවයි. බෙසෙරා සහ වෙනත් අයගේ ප්රතිඵල.[19]] අපගේ ප්රතිඵල සමඟ අනුකූල වේ; ඔවුන් ඇපල් යුෂ පැහැදිලි කිරීම සඳහා ලැකේස්-ග්ලූටරල්ඩිහයිඩ්-පොල් කෙඳි භාවිතා කළ අතර, එහි මුල් වර්ණය 61% කින් අඩු කළේය.
පළතුරු යුෂ වල ඇති පොලිෆෙනෝල් මිනිස් සිරුරට ධනාත්මක පෝෂණ හා චිකිත්සක බලපෑම් ඇති කළද, ඒවා ප්රෝටීන සමඟ ප්රතික්රියා කර යුෂ වලාකුළු, අවසාදිතකරණය හෝ කැළඹිලි සහිත බව ඇති කළ හැකි අතර එමඟින් නිෂ්පාදනයේ රසය හා සුවඳ වෙනස් කර එහි කල් තබා ගැනීමේ කාලය අඩු කරයි.71මෙම අධ්යයනයේ අරමුණ වූයේ ප්ලූරෝටස් ඔස්ට්රේටස් NRC 620 හි ලැකේස් භාවිතයෙන් ඇපල් යුෂ වල ෆීනෝලික් සංයෝග අන්තර්ගතය ආරක්ෂිතව අඩු කිරීමයි. වගුව 1 හි ඉදිරිපත් කර ඇති ප්රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ ලැකේස් ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ වල මුළු ෆීනෝලික් සංයෝග අන්තර්ගතය 4 °C දී ගබඩා කිරීමට පෙර සැලකිය යුතු ලෙස අඩු වූ බවයි. තවද, අධ්යයනය කරන ලද සාම්පල දෙකෙහිම ගබඩා කිරීමේදී මුළු ෆීනෝලික් සංයෝග අන්තර්ගතය ද අඩු විය (වගුව 1). සැන්ඩ්රි සහ වෙනත් අය විසින් කරන ලද පර්යේෂණ.72එන්සයිම ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ වලට එහි ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය සහ ෆීනෝලික් සංයෝග අන්තර්ගතය රඳවා ගත හැකි බව පෙන්වා දී ඇත. කෙසේ වෙතත්, ලෙටෙරා සහ වෙනත් අය විසින් කරන ලද අධ්යයනයක ප්රතිඵල.73දොඩම් යුෂ දිලීර ලැකේස් සමඟ ප්රතිකාර කිරීමෙන් එහි ඇති ෆීනෝලික් සංයෝගවල අන්තර්ගතය 45% දක්වා අඩු කළ හැකි බව පෙන්වා දී ඇත.
ෆීනෝලික් සංයෝගවලට නිදහස් රැඩිකල් ඉවත් කිරීම, තනි ඔක්සිජන් අඩු කිරීම සහ නිවාදැමීම, හයිඩ්රජන් පරමාණු හුවමාරුව සහ නිදහස් රැඩිකලුන් වෙත ඉලෙක්ට්රෝන පරිත්යාග කිරීම වැනි ගුණාංග ඇති බව පෙන්වා දී ඇති අතර එමඟින් ඒවා ප්රබල ප්රතිඔක්සිකාරක බවට පත් වේ.74එමනිසා, මෙම අධ්යයනයේ දී, දින 14 ක් ශීතකරණයක් තුළ ගබඩා කර ඇති ඇපල් යුෂ වල ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වයට ලැකේස් වල බලපෑම ඇගයීම සඳහා DPPH සහ FRAP මත පදනම් වූ ක්රම භාවිතා කරන ලදී (වගුව 2). ගබඩා කිරීමේදී ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වයේ වැඩි වීමක් ක්රම දෙකම පෙන්නුම් කළ අතර, එය නිදහස් ෆීනෝලික් සංයෝගවල වැඩිවීම හෝ මයිලාඩ් ප්රතික්රියා නිෂ්පාදන (MRPs) සෑදීම නිසා විය හැකි අතර, මයිලාඩ් ප්රතික්රියා නිෂ්පාදන ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය වැඩිවීමට හේතුව විය හැකිය.75එන්සයිම නොවන දුඹුරු පැහැ ගැන්වීමේ ප්රතික්රියා (ඇස්කෝර්බික් අම්ල හායනය, මයිලාඩ් ප්රතික්රියා සහ සීනිවල අම්ල-උත්ප්රේරක හායනය ඇතුළුව) දුඹුරු වර්ණක (මෙලනොයිඩින්) නිපදවයි. අතරමැදි ඇස්කෝර්බික් අම්ල හායන නිෂ්පාදන සහ සීනි හායන නිෂ්පාදන (කාබොනයිල් සංයෝග වැනි) මයිලාඩ් ප්රතික්රියා හරහා ඇමයිනෝ අම්ල සමඟ ප්රතික්රියා කළ හැකිය.76ගබඩා කිරීමේදී පලතුරු සහ එළවළු දුඹුරු පැහැ ගැන්වීම පිළිබඳව පුළුල් ලෙස අධ්යයනය කර ඇතත්, මෙම ප්රතික්රියා පිළිබඳ අපගේ අවබෝධය සීමිතය.77FRAP ක්රමය හා සසඳන විට, ලැකේස් ප්රතිකාර කළ ඇපල් යුෂ DPPH ක්රමය මගින් සැලකිය යුතු ලෙස අඩු ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වයක් පෙන්නුම් කළේය (වගුව 2), සහ සියලුම සාම්පලවල ගබඩා කාලය වැඩි වීමත් සමඟ ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය. මෙම අධ්යයනයේදී ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය තීරණය කිරීම සඳහා වෙනස් ක්රම දෙකක් භාවිතා කරන ලද්දේ ඒවායේ මූලධර්ම වෙනස් වන බැවිනි. DPPH ක්රමය නිදහස් රැඩිකලුන් උදාසීන කිරීමේ හැකියාව මනිනු ලබන අතර, FRAP ක්රමය යකඩ අයන අඩු කිරීමේ හැකියාව මනිනු ලබයි. එබැවින්, අධ්යයනය කරන ලද සාම්පලවල ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය වඩා හොඳින් අවබෝධ කර ගැනීම සඳහා ප්රතිඔක්සිකාරක ක්රියාකාරිත්වය තීරණය කිරීම සඳහා බහු ක්රම භාවිතා කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.78
මෙම අධ්යයනයේ ප්රධාන සොයාගැනීම්වලින් එකක් වන්නේ *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 70°C සහ pH 3.0 දී ප්රශස්ත ක්රියාකාරිත්වයක් පෙන්නුම් කරන බවයි. *Trametes versicolor* සහ *Ganoderma lucidum* laccases වැනි යුෂ පැහැදිලි කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වන අනෙකුත් දිලීර ලැක්කේස් සමඟ සසඳන විට, *P. ostreatus* NRC 620 ඉහළ තාප ස්ථායිතාවයක් සහ වඩාත් ආම්ලික pH අගයක් පෙන්නුම් කරයි. *Trametes versicolor* සහ *Ganoderma lucidum* වලින් ලැක්කේස් සාමාන්යයෙන් 50-60°C පරාසයක සහ pH අගය 3.5 සහ 5.0 අතර ප්රශස්ත ක්රියාකාරිත්වයක් පෙන්නුම් කරයි. මෙම වෙනස වැඩිදියුණු කළ යුෂ පැහැදිලි කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාවයට දායක විය හැකිය, විශේෂයෙන් අඩු pH අගයන්හි ස්ථායිතාව තීරණාත්මක වන ආම්ලික යුෂ සඳහා. *P හි අද්විතීය ලක්ෂණය. අධ්යයනය කරන ලද අනෙකුත් දිලීර ලැක්කේස් හා සසඳන විට, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 වඩාත් අභියෝගාත්මක තත්වයන් යටතේ ඵලදායී ලෙස ක්රියා කිරීමේ හැකියාව පෙන්නුම් කරයි. එහි ඉහළ ප්රශස්ත ක්රියාකාරී උෂ්ණත්වය කාර්මික යෙදීම්වල විභව වාසි යෝජනා කරයි, එනම් වේගවත් ප්රතික්රියා අනුපාත සහ අඩු ක්ෂුද්රජීවී දූෂණය වැනි. බොහෝ යුෂ වල ආම්ලික ස්වභාවයට හොඳින් ගැලපෙන එහි අඩු pH අගය, යුෂ පැහැදිලි කිරීමේ ක්රියාවලීන්හි ප්රයෝජනවත් විය හැකිය. මෙම ප්රතිඵල මහා පරිමාණ යෙදීම සඳහා තවදුරටත් ගවේෂණය සාධාරණීකරණය කරයි, එමඟින් *Pleurotus ostreatus* NRC 620 සාම්ප්රදායික දිලීර ලැකේස් ප්රභවයන් සඳහා ශක්ය විකල්පයක් බවට පත් කරයි. පෙර අධ්යයනයන් හා සසඳන විට, ප්රශස්ත උෂ්ණත්වය 60°C වන අතර ප්රශස්ත pH අගය 3.0 බව අපට පෙනී ගියේය. 60°C දී මිනිත්තු 80ක් ප්රතික්රියා කිරීමෙන් පසු, *Ganoderma lucidum* ලැකේස් රඳවා තබා ගනී.46එහි ක්රියාකාරකම් වලින් %.79 කුර්නියාවතී සහ නිසෙල්ට අනුව80, *Ganoderma lucidum* එන්සයිම 25°C සහ pH අගය 5.0 සිට 8.0 දක්වා පරාසයක විශිෂ්ට සිට මධ්යස්ථ ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කරන අතර, pH අගය 6.0 සහ 10 සිට 30°C දක්වා උෂ්ණත්වවලදී ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කරයි. මෙම අධ්යයනයේ දී, *Pleurotus ostreatus* සඳහා එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය සඳහා ප්රශස්ත pH අගය සහ උෂ්ණත්වය පිළිවෙලින් 3.0 සහ 70°C බව අපට පෙනී ගියේය. 40°C සහ 50°C දී පැය දෙකක් පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීමෙන් පසු, එන්සයිම එහි ක්රියාකාරිත්වයෙන් පිළිවෙලින් 68.33% සහ 59.61% ක් රඳවා ගත්තේය. තවද, Pleurotus ostreatus NRC 620 ලැකේස් 50°C සිට 80°C දක්වා පුළුල් උෂ්ණත්ව පරාසයක් තුළ ඉහළ ක්රියාකාරිත්වයක් පෙන්නුම් කළ අතර, උපරිම ක්රියාකාරිත්වයට (69%–98%) ආසන්න විය, උපරිම ක්රියාකාරිත්වය 70°C දී නිරීක්ෂණය කරන ලදී.
නිගමනයක් ලෙස, ස්ථිතික තත්වයන් යටතේ ලබාගත් බෙල්ලන් හතු ලැකේස් NRC620, pH අගය සහ උෂ්ණත්ව තත්වයන් පරාසයක් හරහා ප්රශස්ත ක්රියාකාරිත්වය සහ ස්ථායිතාව පෙන්නුම් කළ අතර, අනෙකුත් එන්සයිම ප්රභවයන්ට සාපේක්ෂව උසස් ස්ථායිතාව පෙන්නුම් කළේය. 10 mM MgSO₄ සහ CuSO₄ එකතු කිරීම එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය පිළිවෙලින් 21% සහ 35% කින් පමණ වැඩි කළේය. ඇපල් යුෂ බවට සැකසූ විට, එන්සයිම pH අගය සහ දුස්ස්රාවිතතාවය අඩු කළ අතර, ගබඩා කිරීමේදී ෆීනෝලික් අන්තර්ගතය සුළු වශයෙන් අඩු විය.
ආහාර කර්මාන්තයේ, විශේෂයෙන් පාන වර්ග පැහැදිලි කිරීමේදී ලැකේස් වල විභවය මෙම ප්රතිඵල මගින් තහවුරු වේ. ෆීනෝලික් සංයෝග විශේෂයෙන් බිඳ දැමීමෙන්, ලැකේස් කැළඹිලි බව අඩු කර පැහැදිලි බව වැඩි දියුණු කරනවා පමණක් නොව, මෘදු ක්රියාකාරී තත්වයන් යටතේ පලතුරු යුෂ වල ගුණාත්මකභාවය පවත්වා ගනී. ජෙලටින්, බෙන්ටොනයිට් සහ සිලිකා ජෙල් වැනි සාම්ප්රදායික පැහැදිලි කිරීමේ කාරක මෙන් නොව, ලැකේස් අපද්රව්ය ජනනය නොකරන අතර පාන වර්ග වලින් ප්රසන්න සුවඳ ඉවත් නොකරයි, එය වඩාත් පරිසර හිතකාමී සහ තිරසාර විකල්පයක් බවට පත් කරයි. තවද, අනෙකුත් එන්සයිම සහ පෙරීමේ ක්රම හා සසඳන විට, ලැකේස් නිෂ්පාදන ගුණාත්මක භාවයට හානි නොකර ඉලක්කගත සහ ලාභදායී විසඳුමක් ලබා දෙයි.
කියෝමුහිම්බෝ, එච්ඩී සහ බ්රින්ක්, එච්ජී. තඹ අඩංගු ලැකේස් වල යෙදුම් සහ නිශ්චලතා උපාය මාර්ග; සමාලෝචනයක්. හෙලියොන් 9, e13156 (2023).
පළ කිරීමේ කාලය: දෙසැම්බර්-15-2025